Priljubljene Objave

Izbira Urednika - 2019

Kaj je predimplantacijska diagnoza pri IVF in kaj kaže?

V tem razdelku boste izvedeli:

Vsaka ženska ali zakonski par, ki se pripravlja na postopek in vitro oploditve (IVF), ima določen strah, povezan z zdravjem nerojenega otroka. Dejansko nihče ne more predvideti, kako bo prišlo do oploditve in kako zdravi bo zarodek. Tudi nekateri absolutno zdravi pari (njihov delež je 5%) po zanositvi, otrok z genetsko boleznijo ali kromosomske anomalije se lahko rodi naravno, kar tudi včasih ne morejo razkriti pred prenatalni pregledi.

Na srečo, danes obstajajo tehnike, ki vam omogočajo, da ugotovite kršitve v strukturi zarodka v prvih dneh njegovega razvoja. Prvič, gre za predimplantacijsko genetsko diagnostiko pri IVF. Poglejmo podrobneje, kaj je bistvo take študije.

Iz imena postopka je že jasno, da je ta genetska diagnoza izvedena pred implantacijo zarodka, ki je bil zasnovan ekstrakorporalno, v maternico ženske. Z naravno zasnovo se PGD ne izvaja.

PGD ​​analiza v IVF je visokotehnološka raziskava, ki se izvaja v najzgodnejšem času razvoja zarodkov - tretji ali peti dan. Glavni namen postopka je izbrati absolutno zdravega zarodka za nadaljnjo presaditev v maternico. Ta analiza se izvaja na majhni količini biološkega materiala in mora biti izvedena v kratkem času.

Pomembno je tudi opozoriti, da mora PGD imeti ustrezne indikacije.:

  • starost nosečnice je starejša od 35 let
  • Starost bodočega očeta je nad 45 let
  • v družini enega ali obeh bodočih staršev se iste onkološke ali genetske bolezni prenašajo iz generacije v generacijo,
  • prisotnost matere v anamnezi smrti ploda (ali novorojenčka) zaradi konflikta Rh, t
  • spontani splav (spontani splavi ali ustavitev razvoja zarodka v zgodnji nosečnosti), t
  • neuspešni poskusi IVF (več kot trije)
  • nizki moški spermogrami (oslabljena spermatogeneza, nizko število semenčic v semenski tekočini, veliko število semenčic z nenormalno strukturo).

PGD ​​omogoča odkrivanje kromosomskih nenormalnosti in genetskih bolezni v zarodku. Ni izključeno, da bo po PGD (PGD) diagnostiki med IVF večkratnih zarodkov ponovna zasaditev zaradi njihove slabe kakovosti povsem preklicana (to se lahko zgodi iz različnih razlogov). Starejša ženska, višji je odstotek zavrnitve zarodkov.

Študija, kot je PGD, je deloma alternativa prenatalni diagnozi, vendar je seveda ne more popolnoma nadomestiti. Ženske, ki zanosijo po IVF s PGD, kot tudi vse druge, morajo opraviti rutinske ultrazvočne preglede in druge preglede za spremljanje intrauterinega razvoja otroka.

Dodati je treba, da je danes v Rusiji malo centrov, kjer se z metodo predimplantacijske genetske diagnoze PGD v IVF ocenjujejo različne vrste genotipov zarodkov - v St. Peterburgu je to reprodukcijski center Genesis. Visoka tehnološka oprema, usposobljenost in dolgotrajna praksa embrioloških zdravnikov, reprodukcijskih strokovnjakov, genetikov omogočajo neplodnim parom, da postanejo srečni starši zdravega otroka.

PGD ​​- kaj je to?

Od trenutka, ko se žensko jajce zlije s človeško spermo, je vse na vnaprej določeni genetski ravni - otrokova barva in rast, intelektualne sposobnosti in spol, kot tudi možne genetske nepravilnosti in bolezni, ki jih je otrok podedoval od staršev, starih staršev ali drugih sorodnikov. .

Predimplantacijska diagnostika je kompleks genomskih študij, ki omogočajo identifikacijo v zarodku, ki je star le nekaj dni, različna razvojna odstopanja, bolezni, sindromi in druge težave. PGD ​​lahko identificira okoli 150 dednih genetskih obolenj, med katerimi so precej pogosti - Downov sindrom, Turner in zelo redko - cistična fibroza, hemofilija, sindrom metuljevih kril itd.

Z uporabo posebnih tehnik in visoko precizne opreme se določijo in pregledajo oboleli zarodki. Za presaditev v maternično votlino ženske uporabljajo samo kakovostne, zdrave in uspešne zarodke.

Standard IVF ne vključuje obvezne stopnje diagnoze pred implantacijo. Po oploditvi in ​​gojenju zarodkov se nekaj dni ocenjujejo le stopnje rasti, stopnje drobljenja in vitalnost zarodkov. Po tem se prenesejo v maternično votlino ženske. Kdo od njih se bo ukoreninil in se ukoreninil, je veliko vprašanje. Učinkovitost standardnega IVF je približno 35%.

Če se izvede predhodna implantacijska diagnostika, potem se bodoči starši morda ne bodo skrbeli za zdravstveno stanje otroka, tudi če imajo določene genetske težave. Poleg tega je učinkovitost IVF s PGD nekoliko višja - približno 40-45%. To je posledica dejstva, da ima velik zarodek, tudi če je vsajen v maternico, zelo malo možnosti za razvoj in preživetje. Zdrav in preučevan zarodek je bolj verjetno, da se oprijema in začne rasti in se razvija.

Namen raziskave

PGD ​​se močno priporoča staršem, ki imajo genetske bolezni, ki jih lahko podeduje otrok. Tudi takšen predhodni genetski pregled zarodkov ne bi prizadel, če bi bile v vrsticah bližnjih sorodnikov prihodnjih staršev prisotne dedne bolezni.

Diagnoza pred implantacijo je pomembna in potrebna za pare, pri katerih eden od staršev nosi bolezen, povezano s spolnim kromosomom. Na primer, ženska nosi gen za hemofilijo, vendar bo otrok bolan le, če je moški otrok. PGD ​​v tem primeru določa spol zarodkov, ki so stari le nekaj dni, in zdravniki izberejo samo zarodke, ki niso ogroženi s hemofilijo, to je deklicami, za presajanje.

Ženska z negativnim Rh faktorjem in več nosečnostmi v preteklosti (ni pomembno, kako so se končali), se priporoča PGD, če je bila sperma moža z pozitivnim Rh faktorjem uporabljena za in vitro oploditev. V tem primeru bodo zdravniki izbrali med vsemi nastajajočimi zarodki le tiste, ki so podedovali materinsko rhesusovo identiteto. V tem primeru se bo nosečnost po IVF nadaljevala z manjšim tveganjem, otrok pa ne bo ogrožen zaradi hemolitične bolezni.

PGD ​​se priporoča za par, če je ženska prej ali prej imela dva ali več splavov, če je prišlo do primerov izpuščenega splava in tudi, če imata oba zakonca v prvem zakonu ali skupaj otroka s kromosomskimi nepravilnostmi ali genetske patologije. Diagnostika pred prenosom omogoča, da se iz števila zarodkov, za katere se presodi, da je treba presaditi, izključijo bolniki ali anomalije, ki niso genetskega izvora.

Predimplantacijska diagnostika v drugem ali tretjem IVF protokolu omogoča, da se z visoko natančnostjo ugotovi vzrok neuspešnih prejšnjih poskusov.

In popolnoma nestandardno, a resnično stanje - starši gredo v IVF, da imajo otroka, ki lahko postane donator, na primer kostnega mozga, za svojega starejšega brata ali sestro. V tem primeru je zanašanje na naravno spočetje preveč tvegano. Rojen otrok morda ni primeren za darovalca za bolnega sorodnika.

Predimplantacijska diagnostika bo pomagala izbrati posameznike iz nastalih zarodkov z določeno kombinacijo genetskih informacij, ki zagotavljajo genomsko naključje med otroki. Ta študija se imenuje HLA-tipizacija.

Kaj kaže raziskava?

Predimplantacijska genetska diagnostika vam omogoča, da predhodno ugotovite različne bolezni in stanja, pri katerih je otrok lahko nezmožen ali invalid. Vse je odvisno od priporočil genetičarja. Če je potrebno, se zarodki pregledajo le za določena merila in genske mutacije, na splošno pa obstaja možnost, da se ocenijo vsi parametri, določeni v študiji.

Na primer, PGD s točnostjo 97-99% določa slepoto in gluhost, prirojeno gluhost, retinoblastom, Fanconijevo anemijo, nevrofibromatozo, fenilketonurijo, miopatijo, torzijsko distonijo, mišično distrofijo Duchene in več deset drugih nevarnih in neozdravljivih bolezni in sindromov.

PGD ​​določa tudi kariotip zarodka, njegovo krvno skupino in faktor Rh, spol, prisotnost mutacij na ravni gena, ki so nenavadne za starše in se prvič manifestirajo.

Kdo je predpisan?

Ker sama diagnoza pred vsaditvijo ni poceni užitek. Priporoča se, da ta korak ni vsaka ženska, ki si je drznila oploditev in vitro. Ponuja se vsem, vendar obstajajo kategorije bolnikov, ki so zelo nezaželeni zaradi zavrnitve predhodne genetske ocene zarodkov pred prenosom v maternico.

Ti bolniki vključujejo:

  • "Starost" ženske in pari. S starostjo se moške in ženske spolne celice starajo in izgubljajo svoje zdravje. Pod vplivom drog, slabih navad, neugodne ekologije in preteklih let, lahko njihov DNK-sklop mutira. Torej je pri ženskah in moških, povezanih s starostjo, tveganje kromosomskih nepravilnosti ploda večje. PGD ​​je zelo priporočljivo za ženske, starejše od 35 let, pa tudi za pare, pri katerih je moški starejši od 40 let.
  • Rh negativne ženskeki so imeli splav, spontani splav, porod, otroci so bili rojeni s hemolitično boleznijo. Diagnoza je pomembna le, če ima zakonec pozitivni krvni faktor rhesusa. Če se uporablja donorska sperma, potem se moški biomaterial najprej izbere z negativnim Rh faktorjem, potem je verjetnost pridobitve Rh pozitivnih zarodkov enaka nič.
  • Ženske, ki že imajo izkušnje z 1-2 neuspešnimi poskusi IVF brez objektivnih razlogov (protokoli so bili izvedeni pravilno in brez zapletov, ni endometrioze in drugih ovir za implantacijo).
  • Če se moška sperma uporablja za oploditev z nizkimi kazalci kakovosti sperme (teratozoospermija, azoospermija, astenozospermija). Z naravno zanositvijo, nizko kakovostne spermije umrejo, nimajo možnosti oploditve, z IVF lahko dobro oplodijo jajce, ker je naravna selekcija oslabljena, kar lahko privede do razvoja različnih bolezni v plodu.

Vrste diagnostike

Obstaja več vrst genetske diagnoze zarodkov. Razlikujejo se glede raziskav, tehničnih odtenkov, opreme in metod raziskovanja. Navedemo glavne, ne da bi šli v laboratorijske in genetske podrobnosti:

  • FISH - To je metoda fluorescentne hibridizacije. To je dokaj standardna študija, katere stroški so nizki v primerjavi z drugimi metodami diagnoze pred implantacijo. Toda njegova natančnost je nekoliko nižja kot pri drugih metodah. Ta metoda se pogosto uporablja v klinikah v Rusiji, Ukrajini in Belorusiji. Tuji kliniki so ga praktično opustili zaradi dejstva, da so se pojavile natančnejše študije. Plus dejstvo, da študija poteka hitro - v nekaj urah. Slaba stran je, da se številni kromosomi ne raziskujejo.
  • CGH - primerjalna metoda genomske hibridizacije. Zelo drag način. In tako finančno kot začasno. Vendar pa je seznam identificiranih patologij večji od tistega, ki je opisan zgoraj, in natančnost je neizmerno višja. Ta metoda diagnoze pred presajanjem vam med drugim omogoča, da ugotovite, kateri zarodki imajo večje možnosti za implantacijo.
  • PCR - metoda polimerazne verižne reakcije. Razkriva Rhesus identiteto zarodka, njegovo krvno skupino in precej velik seznam genetskih težav. Študija zahteva obvezen predhodni pregled bioloških staršev za genske mutacije. Če ženska dobi darovalski zarodek ali se za oploditev vzamejo oocite darovalca, metode PCR ni mogoče uporabiti.
  • Ngs - metoda sekvenciranja. To je sodobna metoda predimplantacijske diagnoze, ki združuje najboljše od vseh zgoraj naštetih. Vendar pa daje najbolj popolno sliko o zdravstvenem stanju zarodkov, njegova cena pa je višja kot pri drugih metodah.

Kako poteka raziskava?

Da bi embriologi in genetiki lahko izvedli PGD, je treba pridobiti zadostno število jajc s predhodno hormonsko stimulacijo. Če je manj kot 3-4, se diagnostika pred implantacijo običajno ne izvede. Ko zdravniki »uredijo« srečanje jajčec s prečiščeno spermo, se razvoj zarodkov spremlja 2-5 dni. Potem lahko embriolog izbere najbolj uspešne. Peti dan blastociste že imajo približno 200 celic. Brez poseganja v zarodek je možno vzeti približno 5-7 celic iz vsakega zarodka za genetske raziskave.

Za zbiranje celic se uporabljajo sodobni visoko precizni laserji, biopsijo celičnih lupin in uporabljajo se druge metode. Raziskava DNK sklopa zagotavlja izčrpne informacije o tem, ali je zarodek zdrav. Potem se priporoča prenos.

Če se par strinja s predhodno genetsko diagnozo zarodkov, se lahko sam prenos zarodkov odloži. Če se s standardnim IVF protokolom opravi 2, 3 ali 5 dni od trenutka oploditve, lahko rezultate PGD pričakujemo od nekaj ur do 5-6 dni. Tako se cikel IVF podaljša za vsaj teden dni. Stroški protokola se lahko povečajo v primeru soglasja za predhodno diagnozo zarodkov za 40-240 tisoč rubljev.

Vse je odvisno od tega, koliko zarodkov nameravate pregledati, katero metodo bomo testirali.

Da bi zmanjšali stroške, lahko par uporabi orodja za kvote, diagnostika je vključena v seznam storitev, ki jih lahko zagotovi OMS, vendar bi morala vsaka klinika to vprašanje pojasniti posebej. Nekateri delajo PGD na račun proračuna, drugi pa ne.

Možni zapleti

Kot smo že omenili, gradivo za študij genetike pridobimo z biopsijo. Kljub ultramoderni natančni opremi še vedno obstaja možnost poškodb zarodka med tem postopkom. Najpogosteje poškodovani so predmet "treh dni". Treba je opozoriti, da je verjetnost poškodbe precej nizka - približno 3%, koristi študije pa bodo veliko večje. V nasprotnem primeru so lahko zapleti s tem IVF enaki kot pri IVF v standardnem protokolu.

Vsaka od stopenj oploditve in vitro je lahko povezana z določenimi tveganji in to nikjer ne bo. Pomembno je, da so vsa tveganja nizka.

Par se mora dobro zavedati, da tudi sodobni in natančni instrumenti, s katerimi zdravniki najvišje kvalifikacijske kategorije ne zagotavljajo 100%, da bo otrok zdrav. Tako se lahko z obsežnim mozaicizmom pojavijo biološke napake in bolan zarodek se lahko prenese na žensko. Ta verjetnost je, vendar je zelo majhna - ne več kot 0,05%.

Po uradnih podatkih Svetovne zdravstvene organizacije IVF s PGD poveča možnost uspeha protokola za približno 7-10% glede na osnovno 35%. Vendar pa v ruskem segmentu interneta ni preveč pozitivnih ocen o diagnostiki pred implantacijo.

Nekatere ženske ugotavljajo, da je stopnja preživetja zarodkov, iz katerih so bile celice odvzete za analizo, nekoliko slabša, zato obstaja kar nekaj pregledov neuspešnih protokolov IVF s predhodno genetsko diagnozo zarodka. Zdravilo ne potrjuje tega priljubljenega mnenja, uradna statistika statističnih podatkov pa ne kaže na zmanjšan odstotek uspešne vsaditve po pregledu zarodkov.

Pogosto ženske sprašujejo, ali je možno narediti IOP za izbiro spola otroka, ker poleg dejstva, da resnično želim otroke, še vedno želim bodisi sina ali hčerko. Tehnična sposobnost določanja spola obstaja, vendar noben zdravnik ne bo izločil zarodkov "nepotrebnega" spola, razen če obstaja specifična navedba genetike. (za bolezni, povezane s spolnim kromosomom). Diskriminacija zarodkov po spolu je v Rusiji prepovedana z zakonom.

Po ocenah je sam proces diagnostike, ki lahko traja več dni, ženski prinaša veliko izkušenj, saj do zadnjega ne ve, koliko visoko kakovostnih zarodkov se je izkazalo in ali so se sploh izkazale. Помимо того, ей нужно поддерживать состояние эндометрия в нужной форме -принимать назначенные лекарства, сдавать кровь на прогестерон, делать несколько УЗИ, чтобы определить толщину функционального слоя матки. Это важно, чтобы перенос прошел максимально успешно и плодное яйцо смогло имлантироваться.

Случается, что пока идет диагностика, «удачное» для переноса время проходит. V tem primeru se lahko protokol prekine in zarodki, ki so opravili test, se zamrznejo in pošljejo kriobanku. Prenos bo izveden v naslednjem protokolu.

O zamotanosti predimplantacijske genetske diagnoze si oglejte naslednji video.

zdravnik, specialist za psihosomatiko, mati štirih otrok

Kaj je PGD

Kromosomski komplet jajčeca ali zarodka je raziskan v laboratoriju. Glede na zgodnji razvoj zarodka se tveganje za poškodbe zmanjša na 1%. Postopek je predpisan vzporedno z glavnim zdravljenjem, ki ga zagotavlja protokol. Vendar pa bo potrebovala več foliklov, zato se hormonska stimulacija jajčnikov izvaja v bolj intenzivnem načinu.

Vse kromosomske mutacije pri starših ne predstavljajo nevarnosti za zdravje njihovega otroka. Razvoj patologije je odvisen od znakov in kombinacije genov pri mami in očetu.

Obstajata dve vrsti mutacijskih znakov: dominantni in recesivni. Prenos prevladujočega mutantnega gena na otroka poveča tveganje za patologijo pri otroku za 50%. Če so starši nosilci recesivne lastnosti, se pojavi genetska bolezen, ko se oba »bolna« gena mame in očeta prenesejo na otroka.

Poleg tega nekatere genetske patologije, povezane s spolom. Tako ženski dvaindvajseti kromosomski par izgleda kot XX in moški XY. Zato kršitve v enem kromosomu žensk ne bodo povzročile bolezni, saj bo druga blokirala njeno delovanje. Zdrav rojen otrok bo nadaljeval "nosilec" okvarjenega kromosoma.

Moški nimajo takšne zaščite, zato jih bodo fantje rodili z genetsko patologijo, dekleta v polovici primerov pa bodo postali nosilci "defektnega" kromosoma.

Z genetsko diagnozo predimplantacije zarodkov genetika vzpostavi posebno kombinacijo, ki jo zarodek podeduje. Pridobljene informacije nam omogočajo, da ugotovimo, ali je otrok rojen s patologijo ali bo postal nosilec kromosomske napake. Vsi zarodki, ki so bili pridobljeni in so bili izbrani najbolj "čisti", so raziskani.

Te analize ne smemo zamenjevati s predhodnim implantacijskim genetskim pregledom. Razlika med PGD in PGS je velika. PGD ​​se izvaja za identifikacijo neozdravljivih genskih patologij in zmanjšanje tveganja za bolnega otroka. PGS je študija, ki vam omogoča, da določite število kromosomov, aneuploidijo, ki je združljiva z rojstvom in fetalnim razvojem zarodka. Preprosto povedano, naloga ASG je povečati možnosti nosečnosti z izbiro zdravih zarodkov. Starši, ki jim je predpisana PGS, nimajo nobene dedne patologije, vendar obstaja tveganje njihovega pojava.

Tako se postopek oploditve in vitro izvaja v povezavi z PGD za te namene: t

  • »Preprečevanje« zarodkov, ki imajo okvarjene gene, ki jih je treba presaditi,
  • Ugotovite, zakaj so se prejšnji protokoli IVF končali brez uspeha,
  • Zmanjšajte tveganje za otroka s patologijo staršev gostiteljev,
  • Določite spol otroka, odpravite kromosomske nepravilnosti po spolu,
  • Identificirajte zarodke, ki so nagnjeni k patologijam genetskega tipa,
  • »Poiščite« zarod, ki je optimalen s sistemom HLA, z drugimi otroki iz družine, ki lahko postanejo darovalci med zdravljenjem,
  • Zmanjšajte verjetnost spontanih splavov v zgodnjih fazah,
  • Zmanjšati možnost hemolitične bolezni, t
  • Izberite enega »idealnega« zarodka, ki odpravlja možnost večplodne nosečnosti.

Genetska diagnostika lahko prepozna in odpravi nevarne patologije:

  • Tay-Sachsova bolezen,
  • Anemija srpastih celic,
  • Gaucherjeva bolezen,
  • Bolezen Verdnig-Hoffman,
  • Retinoblastom,
  • Horey Huntington,
  • Downov sindrom,
  • Nevrofibromatoza,
  • Hemofilija,
  • Miopatija
  • Achondroplasia,
  • Fenilketonurija,
  • Alpersov sindrom,
  • Policistična bolezen ledvic
  • Duchenenova mišična distrofija,
  • Retinitis pigmentosa,
  • Gottingtonova bolezen,
  • Dyushen Myodystrophy,
  • Cistična fibroza
  • Anemia Fanconi,
  • Gluho-nemi
  • Torzijska distonija,
  • Pemfigus,
  • Edwardsov sindrom.

Ta seznam ni omejen na predstavljene patologije: obstaja jih več kot 150 vrst.

Upoštevajte, da so zabeleženi primeri lažno negativnih rezultatov. Dejstvo je, da nekatere raziskovalne metode diagnosticirajo le določeno število kromosomov. "Neobračunani" geni so lahko pomanjkljivi.

Včasih pride do mozaičnega razvoja mutacij. Med študijo se celica diagnosticira kot zdrava, mutacija pa se pojavi med njenim razvojem.

Kdaj je PGD potreben?

Povedali smo že, da PGD ni narejen vsem bolnikom, ki so se prijavili za in vitro oploditev. Obstajajo nekatere navedbe za postopek:

  • Starši so nosilci kromosomskih okvar, zato je tveganje za prenos genetskih nenormalnosti otroka zelo veliko. "Nosilec" zagotavlja prisotnost kromosomske preureditve ali monogenih bolezni.
  • Starostna kategorija staršev: matere nad 36 let, očetje, katerih starost presega 40 let. Starejši zakonci povečujejo tveganje za razvoj genskih mutacij, tudi če imajo bodoči starši »pravi« sklop kromosomov.
  • Po prejšnjih nosečnostih so se rodili otroci, ki so umrli zaradi Rh-konflikta.
  • V jajcih in spermijah so bile ugotovljene poškodovane geni in kromosomi.
  • V spermogramu so ugotovili resne nepravilnosti pri moških (patologije, kot so azoospermija ali oligozoospermija),
  • Prejšnji poskusi zanositve z IVF niso bili uspešni,
  • Pojavljajoče se nosečnosti se končajo s spontanimi splavi v zgodnjih fazah razvoja zarodkov,

Glede na impresiven seznam genetskih bolezni se PGD za IVF opravi za vse ženske, katerih starost je prestopila trideset pet let. Razlog za to so spremembe, povezane s starostjo, ki lahko prinesejo neprijetna presenečenja tudi med naravno nosečnostjo. Staranje jajc se pospeši in poslabša zaradi takšnih dejavnikov:

  • Dolgotrajno zdravljenje z močnimi zdravili
  • Življenjski slog v preteklosti, povezan z uživanjem alkohola, nikotina, drog,
  • Kronična patologija,
  • Nevarni pogoji poklicne dejavnosti, t
  • Slaba ekologija.

V takih primerih je prikazana genetska diagnoza:

  • Rojstvo otroka je povezano s pridobitvijo ustreznih matičnih celic, združljivih s sistemom HLA, za zdravljenje starejšega otroka,
  • Fizusni faktor nezdružljivosti
  • Zakonci so bližnji sorodniki,
  • Par je bil izpostavljen sevanju.

IVF s PGD znatno poveča stroške protokola. Zato se ženska samostojno odloča o potrebi po študiji. Spomnimo se, da se oploditev in vitro samo v 20-40% primerov konča z nosečnostjo. Genetska diagnoza ne bo le prepoznala možnih genskih mutacij, temveč tudi znatno povečala možnosti za uspešno zanositev.

Priprava in vodenje PGD z IVF

Priprava na predimplantacijsko genetsko diagnozo zarodkov vključuje posvetovanje in popoln pregled zakonskega para z ustreznimi indikacijami. Zdravnik podrobno opisuje prednosti in slabosti postopka. Ženi je pojasnjeno, da genetska diagnoza zahteva večje število zrelih jajčec. Zato se bo hormonska stimulacija jajčnikov okrepila, kar poveča tveganje za prekomerno stimulacijo med IVF. Po vseh diagnostičnih ukrepih nadaljujte s postopkom PGD.

Sestavljen je iz sedmih stopenj:

  1. Ekstrakcija jajc in njihovo gnojenje v laboratoriju, t
  2. Fetalni razvoj, ki traja 3-5 dni,
  3. Izbira "najboljših", najbolj uspešnih zarodkov, t
  4. Ekstrakcija celic iz biopsijskega zarodka,
  5. Fiksirni blastomer,
  6. Hibridizacija,
  7. Dekodiranje prejetih informacij.

Še enkrat se spomnimo, da študija ne bo vplivala na zdravje zarodka: organi in tkiva nerojenega otroka "ne sodelujejo" v postopku.

Po dekripciji genetik loči primerne in "pokvarjene" zarodke. Če se odkrijejo 2 kromosoma, ki ustrezajo standardom, potem so taki zarodki predmet ponovne zasaditve. Razvijanja jajčec z okvarjenimi nepravilnostmi ni mogoče vsaditi.

PGD ​​metode

Sodobna reproduktivna tehnologija izvaja PGD zarodka s 4 metodami:

Upoštevajte posebnosti vsake tehnike.

Molekularna citogenetska metoda je drugo ime metode. Široko se uporablja v post-sovjetskem prostoru, ima najbolj demokratično vrednost. Pomembna pomanjkljivost fluorescenčne hibridizacije in situ (ribe) je netočnost diagnoze, saj ta metoda preučuje le del kromosomov.

Za metodo PGD bodo ribe trajale 5 ur. V tem času bo genetik določil naslednje pomembne dejavnike:

  • Zaporedje kromosomov
  • Gender baby,
  • Prisotnost najpogostejših genetskih nepravilnosti.

Metoda se imenuje primerjalna genomska hibridizacija. Potrebno bo veliko več časa in stroškov. Vendar pa ima tehnika številne pomembne prednosti, ki jo razlikujejo od drugih vrst raziskav:

  • "Najde" najbolj sposobne zarodke z najboljšim potencialom za implantacijo,
  • Testira veliko matičnih celic, kar bistveno zmanjšuje tveganje napačne diagnoze,
  • Diagnostični ukrepi se izvajajo z zamrznjenimi jajci, ki se bodo prenesla v krioprotokol.

PCR je polimerna verižna reakcija. Sposoben je »najti« ne le napak v delovanju kromosomov, ampak tudi monogene patologije. Z uporabo PCR določimo protitelesa s starševsko inkompatibilnostjo in Rhesusom zarodkov.

Pred izvedbo študije je pomemben pogoj obvezna diagnoza staršev za prisotnost genskih mutacij. Taka študija bo odpravila napake pri diagnozi patologije, ki izhaja iz mutacije celic.

IVF z donorskim jajcem ne zagotavlja študije s PCR.

Visoko prepustno zaporedje je najnaprednejša diagnostična metoda PGD. Sekvenciranje zdaj-generacije je najdražja in učinkovita genetska diagnoza, ki vam omogoča raziskovanje vseh 23 parov kromosomov. Izvede se celotna genomska analiza, saj se med študijo preveri pravilnost zaporedja DNA.

Stroški genetske diagnoze

IVF zahteva resno porabo. Genetska diagnoza včasih zvišuje ceno, saj so oprema in materiali za postopek zelo dragi.

Nemogoče je nedvoumno odgovoriti, koliko PGD stane, saj je cena študije odvisna od več dejavnikov:

  • Diagnostična metoda
  • Število preučenih zarodkov, t
  • Uporaba dodatnih testov,
  • Študija translokacije kromosomov.

Stroški diagnoze so odvisni od števila raziskanih anomalij.

V Moskvi je cena PGD na zarodek od 25.000 do 30.000 rubljev. Za celovito raziskavo morate plačati od 100.000 do 250.000 rubljev.

Pomen analize PGD

Glavna prednost PGD diagnostike je, da se vsi medicinski postopki izvajajo pred nosečnostjo, medtem ko je plod še vedno zunaj maternice. Analiza je pomembna za pare s povečanim tveganjem, da bodo zarodki imeli resne kromosomske nepravilnosti, ki bodo povzročile:

  • spontani splav
  • težave z implantacijo
  • bledenje nosečnosti
  • rojstvo otroka, ki bo imel intelektualne ali telesne motnje.

Citat: "Pravočasna PGD zarodkov pomaga preprečevati težave, večkrat povečuje možnosti, da se nosečnost konča z rojstvom zdravega otroka."

Marina V. Shapnevskaya, embriolog klinike »Za rojstvo«

Zanimivo je, da IVF s PGD omogoča načrtovanje celo spola zarodka.


Zbiranje celic za PGD analizo

Indikacije za PGD z IVF

Ne vsi pari, ki se odločijo za IVF, opravijo PGD diagnostiko. Za to vrsto raziskav obstajajo stroge medicinske indikacije. Praviloma postajajo kandidati za predimplantacijsko analizo zakonci, ki imajo visoko tveganje prenosa nevarnih genskih motenj na otroke.

Glavni cilji PGD v IVF so:

  • presejanjem zarodkov z motnjami v kariotipu, t
  • zmanjšanje tveganja za prenos zarodka v maternično votlino, ki bo imela genetske nepravilnosti,
  • pravočasno odkrivanje zarodkov, ki so nagnjeni k hudim genetskim motnjam, t
  • ugotavljanje spola nerojenega otroka, da se prepreči prenos spolno povezanih bolezni, t
  • določitev razlogov, zakaj se implantacija ni pojavila v prejšnjih poskusih oploditve in vitro,
  • identifikacija Rh faktorja za zarodek, da se izključi rojstvo otroka s hemolitično boleznijo,
  • izvajanje HLA-tipizacije, če bi bodoči otrok postal donator starejšemu bratu ali sestri.

Raziskovanje prejetega biološkega materiala

Indikacije za diagnozo zarodka pred IVF so:

  • starost ženske je starejša od 35 let in moški je starejši od 40 let,
  • nenormalnosti spermatogeneze,
  • eden od zakoncev je nosilec kromosomskih ali genetskih bolezni v zarodnih celicah, t
  • več neuspešnih poskusov IVF,
  • pri ženskah (če sta v zgodovini dva ali več splavov), t
  • med nosečnostjo zaradi konflikta Rh.

Metode predimplantacijske genetske diagnoze zarodkov

IVF s PGD lahko vključuje samo jajca ali pripravljene zarodke. Slednja možnost je bolj zaželena, saj je čim bolj informativna - v jajčni celici je samo genetski material ženske in oba starša v zarodku.


Vzorčenje materiala za PGD analizo se običajno izvede 3. dan

Med analizo se izvede biopsija enega blastoma v zarodku štirih do desetih obstoječih, ki so v fazi odcepitve. To se običajno zgodi tretji dan. Opravljene manipulacije ne vplivajo negativno na prihodnji plod.

Ko se zarodki preverijo (traja do dva dni), se prenesejo v maternično votlino, kot v običajnem protokolu IVF. Pomembno je, da se ponovna zasaditev izvede najkasneje peti dan razvoja človeškega telesa.

Če se uporablja krioprezervacija, je diagnostični potencial PGD širši. Torej, če vzamete biopsijo in nato ohranite zarodke, lahko opravite vse potrebne študije brez naglice in ponovno presadite naslednji cikel.

Metode za PGD zarodke

Obstaja več učinkovitih metod predimplantacijske diagnoze:

  • FISH. Pomembno, če morate izključiti prisotnost strukturnih ali številčnih kromosomskih nepravilnosti - translokacije in aneuploidije. Material, dobljen med biopsijo, se prenese na stekleno stekelce, segreje na določeno temperaturo in nato postopoma ohladi. V tem primeru se lupina zlomi, citoplazma pride ven. Segmenti DNA so označeni s posebnimi barvili - fluorescentnimi sondami. Po tem, ko uporabite fluorescenčni mikroskop, lahko genetičar prešteje število kromosomov, preverite, ali so med njimi nenormalni.
  • Ngs. To je najnovejša PGD-diagnostična metoda v kriokisku, s katero lahko temeljito pregledate 23 kromosomskih parov. Točnost podatkov, pridobljenih z uporabo NGS, je 99,9%, kar pomeni, da napake niso verjetne. Tehnologija omogoča tudi odkrivanje kromosomskih in monogenih anomalij, mutacij, razlikovanje translokacije od zdravega kromosomskega niza, s čimer se odpravi potreba po biopsiji blastomera.
  • Polimerazna verižna reakcija (PCR). Tehnika, ki je namenjena identifikaciji posebnih kopij DNA. Za to je najprej denaturirano za odvijanje dvojne niti. Nato vzamejo en fragment, mu dodajo specifične encime in počasi podvojijo količino genskega materiala. To omogoča raziskovalcu, da vidi poškodovane nukleotidne cone. Metoda PCR je prikazana, ko je treba izključiti prenos monogenih bolezni na otroka (če je eden od partnerjev ali oboje oba nosilca nezdravih genov ali ima klinične manifestacije nevarne genske patologije).

Treba je opozoriti, da metode PGD v IVF niso 100-odstotno zamenljive. Vsak od njih je zasnovan za identifikacijo posebnih skupin bolezni. Zato lahko le zdravnik odloči, katera od metod je bolj primerna za zakonski par, ki je zaprosil zanj.


PGD ​​- jamstvo za rojstvo zdravega otroka

PGD ​​zarodki - stroški storitev

PGD ​​zarodkov za IVF je precej draga storitev. V moskovski kliniki "Za rojstvo" se cena giblje od 83.500 do 90.500 rubljev. Ta postopek je zelo zapleten in vključuje uporabo drage opreme in inovativnega potrošnega materiala. Za izvedbo lahko le strokovnjaki na najvišji ravni.

V kliniki »Za rojstvo«

Relativno visok strošek genetske diagnoze pred implantacijo je povezan s kompleksnostjo manipulacij. Če spremljate ponudbe specializiranih klinik, se PGD lahko posreduje pod ugodnejšimi pogoji.

Denar, plačan za PGD analize, se vedno izplača - navsezadnje je rojstvo zdravega otroka ogroženo. Zdravljenje in vzdrževanje otroka z resnimi genetskimi nepravilnostmi staršem stane veliko več.

Ali je IVF nevaren s PGD?

Преимплантационная генетическая диагностика применяется во всем мире. Ее безопасность научно доказана. Биопсия осуществляется только на том этапе развития эмбриона, когда его клетки еще не дифференцированы. To pomeni, da se z nadaljnjim drobljenjem odstranjena celica nadomesti z drugimi brez kakršnih koli posledic za prihodnji plod.

PGD ​​ne poveča verjetnosti razvojnih napak pri otroku, ampak nasprotno, zagotavlja rojstvo zdravega otroka.

V St. Petersburgu so izvedli pgd v NGC, tam je bil tudi celoten protokol. Z možem sva stara (38 in 40 let), zelo zaskrbljena! In za dober razlog. Zdravnik Gvasalia je dejal, da je v našem primeru pgd praktično obvezen postopek. Preverili smo štiri zarodke, v postopku smo odkrili najbolj zdrave: dva zasajena. Odraščanje za dva meseca. )
Postopek je neverjeten in zelo koristen !! Seveda smo bili zaskrbljeni, da je biopsija nevarna, vendar so nam v NGC vse razložili, pokazali so celo videoposnetek procesa in s tem ni nič narobe, le prednosti! Še vedno obstajajo različne metode pgd, izbrali smo NGC. Po mnenju zdravnikov, najbolj točne.
>> PGD ne poveča verjetnosti za razvojne napake pri otroku, ampak, nasprotno, zagotavlja rojstvo zdravega otroka.

Res je! Uporabi sodobno tehnologijo, smo v 21. stoletju))

Splošni pojmi

Predimplantacijska genetska diagnostika omogoča celovit pregled in izključuje prisotnost kromosomskih nepravilnosti na splošno ali eno specifično odstopanje. V zadnjem času, vzporedno z zgodnjimi okvarami, je bil opravljen pregled genov, ki lahko povzročijo nastanek tumorjev v odrasli dobi (jajčnikov, črevesja, prsi).

V primeru prenašanja genomskih bolezni pri materi se opravi biopsija več polarnih jajčnih celic pred oploditvijo. Opisane metode so alternativa zgodnji prenatalni diagnozi, ki vam omogoča, da preprečite prekinitev nosečnosti, če bo plod nenadoma imel genetsko patologijo.

Predimplantacijska genetska diagnostika vam omogoča, da določite spol bodočega otroka že v procesu presejanja. Uporablja se za preprečevanje razvoja anomalij, povezanih s spolom.

Kdo je pregledan?

Predimplantacijska genetska diagnostika (PGD) se izvaja v naslednjih primerih:

  1. Prisotnost enega ali obeh par dednih bolezni ali sprememb v kariotipu. Pogosto sami partnerji vedo o svojih težavah, redkeje - bodo izvedeli v procesu pregleda.
  2. Običajni splav. Težave pri tem niso anomalije s strani staršev (morda sploh niso), ampak genetske mutacije ploda, ki povzročajo spontane splave.
  3. Starost oseb, ki so vključene v program IVF, traja več kot 38 let.
  4. Več kot 3 neuspešni poskusi oploditve in vitro v zgodovini.
  5. Moški neplodnost.
  6. Vključitev ICSI (intracitoplazmatska injekcija sperme) v program gnojenja. Proces je poln razvoja genetskih nepravilnosti v zarodku.
  7. Primeri drsenja v zgodovini.

Funkcije PGD

Raziskave na področju predimplantacijske genetske diagnoze kažejo, da ima metoda pravico do obstoja, pomaga pri diagnosticiranju in preprečevanju kromosomskih nepravilnosti, vendar zahteva nadaljnje izboljšave.

Funkcije PGD so naslednje:

  • stopnja spontanih splavov pri presejanju je nižja kot brez nje, t
  • Trenutno ni dokazov, da bi se možnost nosečnosti povečala,
  • obstaja možnost napačnega rezultata: zarodek je zdrav in rezultat kaže nepravilnosti, zarodek je bolan, študija pa kaže drugače (5-10% primerov).

Izvajanje predimplantacijske genetske diagnostike (pregled blastomerjev)

Po dogovoru o in vitro oploditvi reproduktolog oceni potrebo po PGD zakonskega para. Če obstajajo dokazi, se lahko partnerji dogovorijo ali zavrnejo postopek. Potem je podpisan dokument, ki potrjuje dovoljenje za izvedbo raziskave.

Na tretji dan po oploditvi zarodka genetik vzame eno od nastalih blastomerov celic za analizo. Menijo, da to ne vpliva na plod, saj so vse celice zamenljive.

Strokovnjak opravlja raziskave na enem od prej izbranih področij: proučevanje strukture celice pod posebnim fluorescenčnim mikroskopom, preučevanje DNK z metodo verižne reakcije s polimerazo za ugotavljanje prisotnosti mutacije.

Na podlagi rezultatov se zarodki, ki imajo anomalije, ne bodo uporabili v procesu implantacije. Izbira zdrave in kakovostne. Nato se ena ali več izmed njih prenese v maternično votlino matere.

Z biopsijo polarnega telesa pregledamo matični komplet kromosomov. Izvede se v primeru, da ženska linija pokaže prisotnost genetsko določene patologije. Postopek vam omogoča, da ugotovite, ali je jajce zdravo, ki bo uporabljeno za oploditev, ne da bi kršili njegovo strukturo. Če niso ugotovljene nepravilnosti, se lahko uporabi za oploditev in prenos v maternično votlino.

Obstajajo primeri, ko so polarna telesa pregledana, in nato blastomeri. To vam omogoča bolj zanesljiv rezultat. Shemo, po kateri bo izpit potekal, izbere genetik.

Uporabljene metode

Numerične in strukturne motnje kromosomov določimo z metodo fluorescentne hibridizacije. Ta metoda vam omogoča, da določite zaporedje DNA celice. Uporabljajo se posebne DNK sonde, ki so po svoji strukturi komplementarne regije za DNK območja blastomera.

Sonda vsebuje nukleotid in fluorofor (molekulo, ki je sposobna fluorescence). Po interakciji ciljne DNA z DNA sondo se oblikujejo osvetljena področja, ki jih gledamo pod fluorescentnim mikroskopom.

Uporabite tudi metodo PCR (verižna reakcija s polimerazo). Sestavljen je iz kopiranja dela DNK z encimi v določenih laboratorijskih pogojih.

Diagnoza aneuploidije

To je ena od metod predimplantacijske genetske diagnoze, ki omogoča odkrivanje prisotnosti numeričnih kromosomskih nenormalnosti (za določitev dodatnih ali manjkajočih kromosomov).

Genetski material sestavlja 46 kromosomov, od katerih jih polovica da oče, druga polovica pa mati. Če zarodek dobi dodaten kromosom, se imenuje trisomija in izguba monosomije. Te napake lahko vodijo do naslednjih posledic:

  • brez implantacije zarodkov
  • spontani splav,
  • dedne patologije (Down sindrom, Klinefelter, Shereshevsky-Turner).

Moški neplodnost in starost zakonskega para sta pogosta dejavnika pri nastanku takšnih anomalij.

PGD ​​monogene patologije

Predimplantacijsko genetsko diagnostiko zarodkov za ugotavljanje prisotnosti monogenih bolezni izvajamo v družinah, kjer so ugotovljene dedne anomalije. Če par že ima otroka s homogeno boleznijo, potem se možnost, da ima še enega bolnega otroka, poveča večkrat.

Razlog je kršitev zaporedja kromosomov na določenem delu DNK. Te bolezni vključujejo:

  • cistična fibroza,
  • adrenogenitalnega sindroma
  • fenilketonurija,
  • hemofilija
  • anemija srpastih celic,
  • Vernig-Hoffmanov sindrom.

Prednosti in tveganja metode

Predimplantacijska genetska diagnostika, katere pregledi so dvoumni, ima določene prednosti na področju prenatalnega presejanja:

  • Samo visoko kakovostni in zdravi zarodki se prenesejo v maternico,
  • zmanjšuje tveganje za otroka z genetskimi nepravilnostmi, t
  • dvojno tveganje za splav,
  • podvojila tveganje večplodne plodnosti, t
  • možnost za vsaditev zarodkov se poveča za 10%, t
  • 20% povečanje možnosti za uspešno rojstvo otroka.

Tveganje naključne poškodbe zarodka s PGD je 1%. Verjetnost napačnega rezultata je 1:10, poleg tega pa 3% možnosti, da bo zarodek s kakršnokoli anomalijo ocenjen kot zdrav.

Verjetnost, da bodo zdravi zarodki odstopali od rezultatov, je 1:10. Možnost 1: 5, da bo prenos zarodkov v maternico preklican zaradi nepravilnosti, ki jih najdemo v vsaki od njih.

Kontraindikacije

Predimplantacijska genetska diagnostika (PGD), katere posledice za zarodek niso bile natančno opredeljene, ima številne kontraindikacije za:

  • fragmentacija zarodkov več kot 30% (tvorba fragmentov do 25% se šteje za normalno), t
  • prisotnost večjedrnih blastomerov v zarodku, t
  • tretji dan razvoja zarodka ima manj kot 6 blastomerov.

Varnost metode

Diagnozo izvajamo v zgodnji fazi nastanka bodočega organizma, ko so vse njegove celice polipotentne, to pomeni, da se iz vsakega lahko oblikuje polnopravni zdravi organizem.

Vse faze PGD ne povzročajo časa zarodku, plodu in nerojenemu otroku. Po pridobitvi vzorca za študijo se pripravi na poseben način. Celice se položijo na stekleno ploščo, na kateri so fiksirane, ali v pufrski raztopini.

Stroški postopka

Na prvi pogled se zdi, da je predimplantacijska genetska diagnostika, katere stroški se gibljejo od 50 do 120 tisoč rubljev, draga manipulacija. Vendar pa bo zdravje in zdravljenje otroka z gensko določenimi boleznimi stalo veliko več.

Postopek daje vse prednosti pred ženskami, ki lahko otroka spočijejo na naraven način, ker jim taka diagnostična metoda ni na voljo. Predimplantacijska genetska diagnostika, katere cena je v primerjavi s samim in vitro oploditvijo majhna, služi le kot dodatek k splošnemu programu, ki omogoča ne le rojstvo, ampak tudi vzgojo zdravega otroka.

Kako so genetske bolezni podedovane?

Vsaka mutacija ali okvarjen znak pri starših ne more povzročiti bolezni pri otroku. Vse je odvisno od tega, ali je prevladujoča ali recesivna lastnost podedovana od vsakega zakonca in katera kombinacija genov bo imel otrok.

Če je gen, ki prevladuje nad podobnim, nespremenjen, prenesen na otroka, potem obstaja 50% tveganje, da se bo dedna patologija manifestirala. Starši z recesivnim genom bolezni imajo boleče genetsko lastnost. Da lahko otrok razvije klinične simptome patologije, mora podedovati dva recesivna gena.

Obstajajo tudi spolno povezane bolezni. Pri ženskah je dvaindvajseti par kromosomov XX, pri moških pa XY. Če je v genetskem materialu ženske eden od kromosomov okvarjen, potem je zaradi drugega blokiran razvoj bolezni, prisoten pa je tudi nosilec patološkega gena. Pri moških Y kromosom ne more blokirati učinkov patološkega X kromosoma, zato se bolezen manifestira v sinovih takega para in hčerke v 50% so nosilci spremenjenega gena.

Predimplantacijska genetska diagnoza zarodkov pomaga pri 100-odstotni natančnosti ugotoviti, katera kombinacija genskega materiala je podedovana, otrok manifestira bolezen ali pa je nosilec patoloških znakov.

Kdo mora izvajati genetske raziskave?

Za PGD obstajajo določene indikacije. Priporočljivo je opraviti študijo za ženske, ki želijo roditi po 34 letih. V tej starosti, tudi ob naravni pojavnosti nosečnosti, se povečuje tveganje za nastanek otroka z genetskimi nepravilnostmi.

Oociti se postopoma starajo, v življenju so izpostavljeni različnim negativnim dejavnikom:

  • slabe navade matere (kajenje, pitje alkohola),
  • kronične bolezni
  • zdravljenje z zdravili, t
  • škodljivi delovni pogoji (kemični reagenti, fizikalni dejavniki v obliki visokih temperatur, vibracije, ionizirajoče sevanje, elektromagnetna polja),
  • slaba ekologija.

S starostjo se kopičijo okvarjena jajca, kar povečuje tveganje prenosa patoloških genov na potomce. Če se takšen zarodek prenese v maternico, se v večini primerov ne bo ukoreninil, nosečnost pa bo prekinila splav. Če pa nosečnost napreduje, bo kasnejši pregled razkril patologijo, ki bo postala indikacija za prekinitev. Predimplantacijska diagnoza pomaga preprečiti psihološke travme, povezane s spontanim splavom ali rojstvom slabšega otroka. Moški je v starostni skupini tveganja, starejši od 39 let. To vključuje zakonce s patologijo spermatogeneze.

Priporočeno je tudi, da so ženske s spontanim splavom priporočljive. Eden od staršev ima lahko okvaro kromosomov, ki vpliva na razvoj zarodka in povzroči spontani splav.

Bodite pozorni na pare, ki imajo avtosomno dominantno patologijo. Njihovi otroci v 50% bodo nosilci gena ali klinični znaki bolezni.

Opravite tudi raziskave z:

  • 2 ali več neuspešnih poskusov IVF,
  • 3 ali več poskusov prenosa visokokakovostnih zarodkov pri ženskah, mlajših od 35 let, ki se niso končale v nosečnosti,
  • skupina tveganj za pozne bolezni, t
  • željo, da bi bil otrok združljiv s sistemom HLA za pridobitev izvornih celic za zdravljenje drugega otroka z resno boleznijo, t
  • otroka, ki je združljiv z dejavnikom Rh za preprečevanje konfliktov.

Izvedena po indikacijah, PGD pomaga preprečiti kasnejšo prenatalno diagnozo - amniocentezo, ki zmanjšuje tveganje za splav.

Cilji študije

Na podlagi indikacij za diagnozo lahko določite njene cilje:

  1. Izključitev zarodkov z nenormalnim kariotipom.
  2. Ugotavljanje vzrokov za neuspešno vsaditev v prejšnjem IVF.
  3. Zmanjšanje tveganja za otroka z anomalijami staršev staršev.
  4. Identifikacija zarodkov s predispozicijo za resne bolezni.
  5. Imeti otroka, ki je HLA skladen za zdravljenje brata ali sestre.
  6. Zmanjšanje tveganja za nastanek hemolitične bolezni pri rojstvu otroka z določenim Rh faktorjem.

Predimplantacijska genetska diagnostika monogenskih bolezni se izvaja z namenom ugotoviti:

  • cistična fibroza,
  • Bolezen Tay-Sachs,
  • hemofilija A,
  • Duchenne myodystrophy,
  • anemija srpastih celic.

Iskanje kromosomskih nepravilnosti vključuje študijo devetih, ki so vzrok za naslednje sindrome:

  • Down (kromosomi trisomije 21),
  • Patau (13. kromosom),
  • Edwards (18),
  • Shereshevsky-Turner,
  • Klinefelter,
  • "Mačji učenci" (22),
  • kromosomi 15, 16, 17.

Tudi genetsko iskanje vam omogoča, da prepoznate številne druge bolezni.

Diagnostične tehnike

Za PGD se uporabljajo zarodki ali jajca. Toda v prvem primeru je študija bolj informativna zarodek ima očetov genetski material, ki lahko prenaša okvarjene gene.

V študiji izvedemo biopsijo enega blastomera v obstoječem zarodku, ki je v fazi drobljenja. To se dogaja 3-5 dni. Prizadeti plod se ne poškoduje.

Tehnika se lahko uporablja samo v IVF postopku, v kombinaciji z ICSI - umetno osemenjevanje s spermo. To naredimo tako, da v procesu biopsije blastomera genetski material spermija, ki ni bil vključen v oploditev, ni bil uporabljen za študij.

Nadaljnji prenos zarodkov in obvladovanje nosečnosti poteka tako kot pri normalnem IVF. Za analizo je dodeljenih samo 2 dni, ponovna zasaditev naj bi se zgodila najkasneje 5 dni po razvoju. Več možnosti za diagnozo v ciklu s krioprezervacijo. Če opravite biopsijo nekaterih zarodkov in jih nato ohranite, lahko varno izvedete največjo možno raziskavo, za naslednji cikel pa ponovno zasadite visokokakovostni zarodek.

Razvil je več tehnik za PGD.

Uporablja se za diagnostiko numeričnih ali strukturnih kromosomskih sprememb - aneuploidija in translokacije. Celica, pridobljena z biopsijo, se fiksira na drsnik, segreje in ohladi. Ko se to zgodi, razpoka lupine in sproščanje citoplazme. Segmenti DNA so označeni s fluorescentnimi sondami - posebnimi barvili. Poleg tega lahko v posebnem fluorescentnem mikroskopu preštejete specifične kromosome, ugotovite normalne in patološke.

Polimerazna verižna reakcija temelji na identifikaciji specifičnih kopij DNA. Za začetek je denaturiran, da se odvija dvojna nit in dobi en fragment. Z dodajanjem posebnih encimov se količina genskega materiala postopoma podvoji. To vam omogoča, da odkrijete pomanjkljiva mesta v nukleotidu. Tehnika se uporablja za iskanje monogenih bolezni, ko je eden ali dva zakonca opredeljena kot nosilec okvarjenih genov ali s kliničnimi znaki bolezni.

  • Najnovejša tehnika NGS

Novost je preimplantacijska genetska diagnostika v kriociklu z metodo NGS, s pomočjo katere je mogoče preučiti vseh 23 parov kromosomov. Njena natančnost doseže 99,9%. Istočasno poteka študija monogenskih in kromosomskih bolezni ter mutacij. Tehnika omogoča razlikovanje med uravnoteženimi translokacijami od običajnega niza kromosomov. Zato ni treba ponoviti biopsije blastomerov. Visoka avtomatizacija procesov odpravlja dodatne napake.

Koristi in tveganja

Uporaba genetske analize zarodka v fazi odcepitve poveča možnosti za uspešno vsaditev. Доказано, что хромосомные изменения у зародышей увеличивают вероятность выкидыша на раннем сроке, формирование неразвивающейся беременности. В 21% случаев самопроизвольного прерывания беременности, в том числе полученной методом ЭКО, причиной прерывания становится хромосомная патология плода. С возрастом количество аномалий увеличивается в геометрической прогрессии.Če upoštevamo, da se ženske starejše starostne kategorije najpogosteje zatekajo k asistirani reprodukcijski tehnologiji, postane jasno, da je treba diagnostiko opraviti pred ponovno zasaditvijo zarodkov.

Pridobljene informacije lahko zdravnik uporabi pri nadaljnjih poskusih IVF, kot tudi navede razloge za prejšnje neuspešne poskuse oploditve.

Pri uporabi PCR ali fluorescenčne metode lahko pregledamo le določeno število kromosomov. Zato so lahko nekatere pomanjkljivosti podedovane.

V predimplantacijski genetski diagnozi se zgodi, da je abnormalni zarodek definiran kot normalen. V tem primeru bo kasnejša prenatalna diagnostika pomagala natančno diagnosticirati patologijo. Na tej stopnji razvoja znanosti PGD ne more popolnoma nadomestiti slednje. Včasih genetske anomalije tvorijo mozaiki. V tem primeru bo biopsija enega blastomera potrdila normalno stanje zarodka in bolezen bo nastala zaradi napake spremenjene celice.

Poškodbe zarodkov med biopsijo so izjemno redke, v 0,1% primerov. Ne smemo pozabiti, da tudi po uspešni diagnozi in ponovni zasaditvi normalnega zarodka lahko IVF ne uspe zaradi neznanih razlogov. V tem primeru so vzrok lahko imunske motnje v materinem telesu, nediagnosticirane bolezni. Samo popolna preiskava v smislu priprave na IVF, zdrav življenjski slog poveča možnosti za zanositev.

Vsebina

Zamisel o predimplantacijski genetski diagnozi se je pojavila pred rojstvom prvega IVF otroka. Leta 1967 je R. Edwards objavil članek (R. G. Edwards) in R. Gardner (R. L. Gardner) o izvedbi biopsije zarodkov za določanje spola pred implantacijo, pri katerih so avtorji napovedali pojav podobnih tehnologij pri ljudeh [2]. Vendar pa je predimplantacijska genetska diagnostika pri ljudeh postala možna šele v zgodnjih devetdesetih letih, ko je bila dosežena zadostna tehnološka raven oploditve in vitro, in razvila se je verižna reakcija s polimerazo, ki je omogočila analizo DNK v posameznih celicah.

Leta 1989 je bil prvi uspešen poskus določitve spola izveden s PCR analizo blastomera, odvzetega iz zarodka na stopnji cepitve (6-8 blastomerov) [3]. Prve uspešne pošiljke po podobnem postopku pri parih, pri katerih obstaja tveganje za recesivno X-povezano bolezen, so se zgodile leta 1990 [4].

Leta 1990 je bila pred oploditvijo diagnosticirana monogenska bolezen, tehnika pa je vključevala PCR analizo polarnih jajčnih celic [5].

Prvo rojstvo otroka po preimplantacijski PCR diagnozi monogene bolezni (cistične fibroze) se je zgodilo leta 1992 [6].

Nato smo uporabili fluorescenčno hibridizacijo in situ (FISH) za določanje spola zarodka, pa tudi kromosomskih nenormalnosti. Od leta 2012 postopoma nadomestimo metodo FISH za določanje kromosomskih nepravilnosti s primerjalno genomsko hibridizacijo. Metoda PCR je ostala nepogrešljiva za diagnosticiranje monogenskih bolezni.

Predimplantacijska genetska diagnoza je indicirana za pare, ki imajo nosilca kromosomske preureditve ali monogene bolezni. Primeri monogenskih bolezni vključujejo cistično fibrozo, Tay-Sachsovo bolezen, anemijo srpastih celic, hemofilijo A, Duchennovo mišično distrofijo in mnoge druge.

Poleg tega se predimplantacijska genetska diagnostika izvede pri parih s povečanim tveganjem za prirojene nepravilnosti pri otrocih, ki ni povezana s prenašanjem diagnosticiranih mutacij. Takšni primeri vključujejo pare, pri katerih je starost matere starejša od 35 let, kjer je očetova starost starejša od 39 let, če ima oče hudo prizadeto spermatogenezo, pari z običajnim splavom, pari s ponavljajočimi se neuspešnimi poskusi IVF.

V primeru nedefiniranega povečanega tveganja za otroka s prirojenimi anomalijami se za devet kromosomov, ki so povezani z najpogostejšimi prirojenimi boleznimi, opravi predimplantacijska genetska diagnoza. To so kromosom 13 (Patau sindrom), kromosom 15 (Prader-Willijev sindrom), kromosom 16, kromosom 17, kromosom 18 (Edwardsov sindrom), kromosom 21 (sindrom Down), kromosom 22 (sindrom mačk učencev) in tudi spol. kromosomi X in Y (različne numerične anomalije, vključno s Shereshevsky-Turnerjevim sindromom in Kleinfelterjevim sindromom).

Predimplantacijska genetska diagnoza se v nekaterih primerih ne nanaša na možno genetsko patologijo zarodka, namen takšne diagnoze je rojstvo otroka z določenimi genetskimi značilnostmi. Takšni primeri vključujejo na primer predimplantacijsko genetsko diagnostiko, ki se izvaja za preprečevanje konflikta z rezusom.

Obstajajo primeri, ko je kombiniranih več pogojev za predimplantacijsko genetsko diagnostiko. Eden od takih primerov je primer, ko se je s preimplantacijsko genetsko diagnozo v probandu rodil HLA-kompatibilen donator za celično zdravljenje anemije Fankoni [7]. V tem primeru je bila izključena Fanconijeva anemija in izbran je bil želen tip histokompatibilnosti.

Opravljanje predimplantacijske diagnoze je možno le v okviru ciklusa zdravljenja IVF, in sicer in vitro oploditev z intraplazmičnim injiciranjem spermatozoidov (ICSI), tj. Spermatozoon se ročno injicira v jajce s pomočjo mikrokirurških instrumentov. Postopek ICSI je potreben zaradi dejstva, da se v normalnem IVF v jajčno celico doda veliko število sperme. Nato pri zbiranju polarnih teles ali blastomerov obstaja tveganje, da genetski material spermija, ki ni sodeloval pri oploditvi, pride v analizo z zarodno celico.

Priprava na cikel zdravljenja in cikel zdravljenja IVF s samim PGD se ne razlikuje bistveno od običajnega ciklusa zdravljenja IVF:

  1. ženska prejme hormonska zdravila za spodbujanje superovulacije,
  2. se izvaja punkcija transvaginalnega folikla,
  3. oploditev jajčec s spermo se izvaja v laboratoriju za embriologijo,
  4. prenos zarodka v maternico traja 5-6 dni.

Če je genetska motnja podedovana od ženske, potem lahko »zdrave« zarodke izberemo tako, da preskusni postopek opravimo le v polarnih telesih, ne da bi se dotaknili zarodka. Prav tako lahko preizkusite samo blastomere. Ali pa lahko izvedemo zaporedno študijo polarnih teles, nato blastomere.

Katero vrsto PGD sheme bomo uporabili za vsak posamezen primer, določimo po posvetovanju z genetskim zdravnikom ali posebej usposobljenim PGD svetovalcem pri načrtovanju PGD.

V prvi delitvi mejoze je oocita prvega reda razdeljena, kar ima za posledico nastanek oocita drugega reda in majhno prvo redukcijsko telo (obe celici s haploidnim nizom kromosomov). V drugi delitvi mejoze se zaradi delitve oocita drugega reda oblikuje ena jajčna celica in drugo redukcijsko telo. Prvo redukcijsko telo se včasih tudi deli na dve identični majhni celici. Zaradi teh transformacij jajčne celice prvega reda se oblikujejo ena jajčna celica in tri redukcijska telesa, kjer imata tako jajčna celica kot redukcijska telesa haploidni sklop kromosomov. Tako je mogoče raziskati polarne organe, da bi ugotovili, ali je jajčece podedovalo genetsko napako.

Po oploditvi jajčec v spermi v embriološkem laboratoriju se zarodek razvije - celice se delijo. Na tretji dan je zarodek sestavljen iz 6-8 blastomerov. Tretji dan pa se zbere biološki material za genetske raziskave - tako imenovana »biopsija zarodkov«, to je ekstrakcija enega blastomera iz zarodka (in včasih tudi polarnih teles) s pomočjo posebnih mikrotoolov. Postopek ne krši nadaljnjega razvoja zarodka. Medtem ko se izvaja genetska diagnostika, se zarodki še naprej razvijajo v ustreznem gojišču kulture, dokler se ne prenesejo v maternico 5. dan razvoja. Do takrat mora zarodek doseči stopnjo blastociste.

Pred prenosom embriolog oceni strukturo in obliko zarodkov. Rezultat genetske diagnoze primerjamo z morfologijo zarodkov in sklepamo, kateri zarodki se priporočajo za prenos v maternico. Za prenos so zarodki z najboljšimi morfološkimi značilnostmi izbrani brez genetskih motenj.

Analiza se izvede v zelo kratkem času. Za analizo blastomerov je na voljo le 2 dni, saj zarod ne more nadaljevati razvoja zunaj materinega telesa onkraj faze blastociste (5. dan po oploditvi), zato je treba študijo opraviti v tem kratkem času.

Alternativni pristop je izvedba PGD v cryocycle. V tem primeru se opravi biopsija 5. dan razvoja in takoj za tem se zarodki podvržejo krioprezervaciji. V naslednjem mesecu se izvede genetska diagnostika in priporočeni zarodki brez mutacij se prenesejo v maternico med naslednjim ciklom. Praksa nepovezanega cikla ima več prednosti: manjše tveganje prekomerne stimulacije, več materiala in časa za analizo, manj travmatični postopek za biopsijo zarodka. Pomanjkljivost krioskopa je daljši čas od začetka stimulacije do prenosa zarodkov [1].

  1. Za numerične in strukturne kromosomske nepravilnosti uporabljamo FISH (fluorescentna hibridizacija) in situ). Ponavadi se izvaja za analizo numeričnih motenj treh, petih ali sedmih kromosomov, najpogosteje kromosomov 13, 18, 21, X in Y.
  2. Sodobna alternativa metodi FISH je primerjalna genomska hibridizacija na mikročipih (GHS). GHS omogoča testiranje vseh kromosomov hkrati.
  3. Pri izvajanju PGD monogenih bolezni se uporablja metoda PCR.

Metoda fluorescentne hibridizacije in situ (FISH) je metoda citogenetske analize, ki se uporablja za identifikacijo in lokalizacijo specifičnih zaporedij DNA na metafaznih kromosomih in v interfaznih jedrih. Ta metoda uporablja DNA sonde, ki so nukleotidne sekvence omejene velikosti, ki je komplementarna specifični regiji jedrne DNA. Sonda nosi "oznako", tj. Vsebuje nukleotide, povezane s fluoroforom (molekulo, ki je sposobna fluorescence). Po postopku hibridizacije v primeru tvorbe hibridne molekule DNK sondo in ciljne DNA na citogenetičnem pripravku, ki se preučuje, lahko luminescenco določenih zaporedij DNA na kromosomih ali jedrih opazimo s fluorescenčnim mikroskopom.

Polimerazna verižna reakcija je metoda, ki temelji na večkratnem selektivnem kopiranju določenega dela DNK z uporabo encimov v umetnih pogojih (in vitro). Kadar se to zgodi, se kopira samo območje, ki izpolnjuje določene pogoje, in le, če je prisotno v vzorcu, ki se preučuje.

Loading...